研究 | 维生素 B12 缺乏与新冠后遗症症状之间有关联吗？

近期研究探讨了维生素 B12 缺乏与新冠后遗症症状之间的关联，尽管证据表明维生素 B12 缺乏并非普遍存在，但与部分患者群体相关。

维生素 B12 在神经功能、能量代谢和炎症消退方面发挥作用，这可能与新冠后遗症的持续性问题（如疲劳和脑雾）有关。

主要研究发现

发表在《科学报告》上的一项研究发现，补充维生素 B12 可以调节新冠后遗症患者（轻度感染后 10-16 个月）的外周血生物标志物，这些患者存在视觉空间结构障碍。维生素 B12 通过甲基依赖性表观遗传机制发挥作用，调节中重度新冠患者的过度炎症反应。

一项针对超过 10,000 名参与者的英国研究表明，维生素 B12 缺乏与注意力不集中和记忆力下降有关，这与新冠后遗症的认知症状（如脑雾）存在重叠。

患病率和症状

维生素B12缺乏并非新冠长期症状中最主要的因素，但它与神经系统症状（例如注意力不集中、疲劳）相关，并且可能因感染后肠道菌群的变化而加重。一项分析指出，新冠长期症状患者和康复患者的益生菌组成存在差异，这间接支持了维生素B12在脑-肠轴健康中的作用。

目前尚无2025-2026年的大规模研究证实维生素B12缺乏在所有新冠长期症状病例中“非常普遍”；一些小型报告强调了维生素B12缺乏在特定症状群体中的存在。

补充建议

专家建议在医生指导下，将维生素B12与维生素C、镁和益生菌一起服用，以期缓解症状——首先进行检测，以避免过量服用，因为某些情况下可能会出现过量服用。

剂量：如果维生素B12缺乏，成人可能需要每日摄入500-1000微克，可通过食物（肉类、鸡蛋、乳制品）或补充剂摄入。咨询医生，尤其是对于新冠后遗症常见的吸收障碍。

以下为相关文献分享《Vitamin B12 as an epidrug for regulating peripheral blood biomarkers in long COVID-associated visuoconstructive deficit 维生素B12作为一种表皮药物用于调节长新冠相关视觉建构缺陷中的外周血生物标志物》。

摘要

在轻症COVID-19感染康复后约四个月，约25%的患者出现视觉建构障碍（VCD），且VCD与外周免疫标志物升高以及脑结构和代谢成像的改变相关。近期研究表明，补充维生素B12可通过甲基依赖性表观遗传机制调节中重症COVID-19期间的过度炎症反应。本研究采用轻症COVID-19感染后10至16个月内确诊为持续性VCD的患者和无视觉障碍的对照组的外周血样本进行全血培养。该实验模型用于评估先前与COVID-19长期症状相关的11种生物标志物的白细胞表达模式，并探讨维生素B12在调节这些基因方面的潜力。结果显示，与对照组相比，持续性VCD患者的CCL11和LIF表达持续上调。值得注意的是，血清CCL11水平升高此前已被证实与年龄相关的神经退行性疾病有关。值得注意的是，在VCD患者的血液培养物中添加1 nM维生素B12可使CCL11 mRNA水平恢复正常，上调神经保护因子HGF，并在一定程度上下调CSF2和CXCL10。研究还观察到CCL11 mRNA水平与其启动子区域特定胞嘧啶的甲基化水平呈负相关。这些发现强调了全身炎症在与新冠长期相关的持续性VCD中的重要性。此外，该研究提供的证据表明，维生素B12作为一种表观遗传药物，有望成为治疗这种认知障碍的有效方法。

引言

“长新冠”一词用于描述新冠肺炎的长期症状，包括认知功能障碍（也称为“脑雾”），这些症状会损害记忆力、注意力和问题解决能力。这些症状可能在感染痊愈后持续数周甚至数月1,2。虽然长新冠的确切病因尚未完全明确，但普遍认为与免疫系统对病毒的反应及其引起的全身炎症有关（综述见3）。

在之前一项针对轻症新冠肺炎患者的前瞻性队列研究中，研究人员发现，约25%的年轻人（平均年龄38岁）在感染康复四个月后，在雷伊-奥斯特里思复杂图形（ROCF）测试的临摹阶段表现出显著的认知障碍4。ROCF是一项神经心理学测试，要求受试者绘制复杂图形，以评估其视觉空间能力、执行功能和记忆保持能力（综述见5）。视觉建构和记忆测试的表现主要与学习、问题解决能力以及多种日常生活活动（例如定向和导航）相关6。这些过程通过涉及多个脑区（包括枕顶叶区域、背侧和腹侧通路以及与扣带回、内侧颞叶和额叶皮层的连接）将视觉信息的感知和解释与记忆和执行系统整合起来7。值得注意的是，在被诊断为视觉建构缺陷（VCD）的个体中，ROCF测试的表现与胼胝体膝部（延伸至扣带束）左右两侧的白质体积以及右侧背侧前扣带回的葡萄糖代谢呈负相关。此外，在VCD患者中上调的11种血浆生物标志物中，有10种之间存在功能性相互作用网络。其中4种生物标志物是神经炎症信号通路的组成部分，另外4种是IL-17信号通路的组成部分。事实上，有证据表明，外周固有免疫系统分子可以触发中枢神经系统（CNS）的继发性神经炎症反应8,9,10。

表观遗传机制调控着对免疫反应、神经元功能和神经炎症过程中突触可塑性至关重要的基因表达。在这方面，表观遗传改变可能导致新冠长期症状患者的认知功能障碍。例如，Lee及其同事报道，新冠长期症状患者某些参与免疫反应和炎症的基因中DNA甲基化水平较高11。DNA甲基化是指在DNA中的胞嘧啶碱基上添加甲基（-CH3）的过程。这种修饰可以通过改变DNA与其结合蛋白之间的相互作用来调控基因表达12,13。值得注意的是，DNA甲基化模式的失调与多种脑部疾病相关，包括抑郁症、焦虑症和认知功能下降（综述见[参考文献]）。

维生素 B12 是蛋氨酸合成酶的必需辅因子，该酶催化硫氨基酸途径中同型半胱氨酸转化为蛋氨酸。S-腺苷甲硫氨酸是所有细胞甲基化过程中使用的甲基供体，它来源于蛋氨酸16。因此，研究表明，补充维生素 B12 可增加炎症性疾病中关键基因的甲基化，从而导致这些基因表达下调。这种效应此前已在肺炎球菌性脑膜炎的幼鼠模型17和急性 COVID-19 患者的全血培养物中得到证实18。这些发现凸显了维生素 B12 作为一种表观遗传药物在减轻过度炎症方面的潜在治疗作用，并为进一步研究与 COVID-19 长期症状相关的神经炎症性疾病提供了有希望的方向。

本研究的主要目的是识别与长期 COVID-19 患者（既往曾经历轻度急性 COVID-19 发作）持续性 VCD 相关的外周血生物标志物。此外，本研究还旨在探索在调控这些生物标志物中发挥作用的甲基依赖性表观遗传机制，并研究维生素 B12 在调节白细胞中这些基因表达方面的潜力。

方法
患者

本研究是纵向研究项目的一部分，该项目纳入了在完成疫苗接种程序之前且在 Omicron 变异株出现之前曾感染轻度 COVID-19 的个体队列。这项前瞻性观察性队列研究已获得米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG) 机构审查委员会 (IRB) 的批准 (CAAE3768820.1.0000.5149)。所有参与者均签署了书面知情同意书。本研究符合《赫尔辛基宣言》的原则。志愿者在经 RT-qPCR 检测确诊为轻度 COVID-19 约四个月后入组。根据世界卫生组织临床分级量表19，疾病严重程度分为1级或2级。在招募访视以及随后6个月和12个月的随访访视中，评估了所有志愿者的临床状况和心理健康状况，采集了外周血样本，检测了45种血浆生物标志物（细胞因子、趋化因子和生长因子），并采用神经心理学和眼科检查、PET-CT和磁共振神经影像学进行了全面检查。这些程序在文献4中有详细描述。排除标准包括：自述自身免疫性疾病史、慢性精神或神经系统疾病、反复感染、药物滥用、既往脑部手术史以及COVID-19治疗期间接受过气管插管或口咽插管。关于神经心理学评估和排除标准的详细信息已在之前基于该队列研究发表的文献4,20中详细记录。研究时间线见图1。本研究纳入了7名在招募访视期间被诊断为VCD的个体。此外，纳入了五名轻症 COVID-19 患者作为对照组。这些患者在招募时以及 6 个月和 12 个月的随访中均未表现出任何 VCD 或其他可能与感染相关的神经心理后遗症。约 30% 的参与者在招募和 6 个月随访之间退出了研究20。女性的随访参与率更高，而男性的参与率在 6 个月后显著下降。因此，本研究排除了男性。由于研究人群的特殊性——感染者在完成疫苗接种之前且在 Omicron 变异株出现之前——因此无法增加样本量。

研究时间线（使用 BioRender.com 创建）。

叶酸、同型半胱氨酸和维生素 B12 基础水平的评估

所有志愿者的血浆样本中叶酸（维生素 B9）、同型半胱氨酸 (HCY) 和维生素 B12 的基础水平均由商业临床实验室（巴西贝洛奥里藏特 Geraldo Lustosa 实验室）采用标准化学发光法进行定量分析。

全血培养

按照 Cassiano 等人18 所述的方案，使用上午 8 点采集的肝素钠抗凝血样本进行全血培养。简而言之，将血液样本与 50% (v/v) RPMI 1640 培养基（美国密苏里州圣路易斯 Sigma-Aldrich 公司）混合。采用两种不同的条件：终点 A，培养基中添加赋形剂（柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 5，默克公司，德国达姆施塔特）；终点 B，培养基中添加氰钴胺素（默克公司），终浓度为 1 nM。然后将培养物在 37 °C、5% CO₂ 的湿润环境中孵育 24 小时。

实时定量 PCR (RT-qPCR)

使用 QIAamp RNA 血细胞提取试剂盒（Qiagen 公司，德国希尔德）从白细胞中提取总 RNA。

en，德国），并使用高容量 cDNA 逆转录试剂盒（Thermo Fisher，Waltham，MA）生产 cDNA，如前所述18。采用特异性引物，在SYBR Green（Thermo Fisher）或TaqMan（Thermo Fisher）平台上，按照制造商的说明，对CCL2（C-C基序趋化因子配体2）、CCL11（C-C基序趋化因子配体11）、CSF2（集落刺激因子2）、CXCL10（C-X-C基序趋化因子配体10）、HGF（肝细胞生长因子）、IL1RA（白细胞介素1受体拮抗剂）、IL6（白细胞介素6）、IL10（白细胞介素10）、IL31（白细胞介素31）、LIF（白细胞介素6家族细胞因子）和NGF（神经生长因子）的mRNA水平进行定量。这些基因编码血浆炎症因子和生长因子，这些因子此前已在该队列中与长期COVID-19患者的血管功能障碍（VCD）相关4。目标基因表达水平以 18S 核糖体 RNA (18S 核糖体 N1) 进行标准化，并使用 2e(-ΔCt) 法计算相对基因表达量21。引物序列和 TaqMan 检测 ID 列于补充文件 1 中。每个样本均进行两次技术重复检测。

亚硫酸氢盐测序 PCR

为了评估 VCD 和补充维生素 B12 对位于 CCL11 启动子区域和第一外显子近端部分的 17 个 CpG 位点甲基化水平的影响，我们使用亚硫酸氢盐测序 PCR (BSP) 分析了终点 A 和 B 培养物中获得的 DNA 文库。分析对象包括受损组和非受损组。

BSP 文库的构建、测序和生物信息学分析均按照文献18所述进行，并稍作修改。 DNA分离后，使用EZ DNA甲基化-Gold试剂盒（Zymo Research，加利福尼亚州尔湾市）将未甲基化的胞嘧啶核苷酸转化为尿嘧啶。利用针对胞嘧啶转化为尿嘧啶而设计的引物组（亚硫酸氢盐引物设计工具，Zymo Research）（补充文件2）和GoTaq DNA聚合酶（Promega，威斯康星州麦迪逊市），通过PCR扩增CCL11基因（GRCh38/hg38 chr17: 34283173–34286052）-2569 bp至+310 bp的DNA区域。使用Bismark软件22进行过滤后序列的比对以及CG位点甲基化百分比的计算。仅将唯一比对至人类基因组参考序列 chr17: 34,283,173–34,286,052（Gencode，第 38 版）的 reads 纳入甲基化分析。CCL11 的功能注释来自 UCSC Genome Browser23。

统计分析

统计分析使用 GraphPad Prism 软件（版本 8.0.2，GraphPad Software Inc.，Irvine，CA）进行。数据分布采用 Anderson-Darling 检验、D’Agostino & Person 检验、Shapiro-Wilk 检验和 Kolmogorov-Smirnov 检验进行评估。如果数据通过至少一项正态性检验（α = 0.05），则认为数据符合参数分布。根据数据分布情况，采用双尾学生t检验、配对学生t检验、Mann-Whitney检验或Wilcoxon检验对各组进行比较。统计学显著性定义为P值小于0.05。数据以中位数±四分位间距表示。

采用非配对t检验比较各组间每个CG位点的甲基化倍数变化。仅选择在比较组间存在统计学显著差异的位点进行后续分析。为评估差异甲基化位点（DML）的甲基化倍数变化与同一培养物中RT-qPCR定量的CCL11基因表达水平之间的相关性，根据数据分布情况采用Pearson相关系数或Spearman相关系数进行检验。

在DML区域寻找转录因子结合位点

在JASPAR CORE 2022数据库（https://jaspar.genereg.net）中搜索了DML区域的转录因子结合位点（TFBS）。该数据库是一个开放获取且定期更新的资源，包含人工整理的转录因子（TF）结合谱24,25。

结果
样本特征

本研究纳入了平均年龄为40.7±8.5岁的女性参与者。如表1所示，最初诊断为VCD组和非VCD组的年龄差异无统计学意义。值得一提的是，所有参与者在随访时均已接种至少两剂SARS-CoV-2疫苗（科兴新冠疫苗、辉瑞疫苗或阿斯利康疫苗）。

在最初诊断为VCD的7名患者中，4名（57%）在随访期间仍表现出该疾病，而3名患者未出现进一步的损害迹象。如表1所示，5名未受损的对照组个体维持了其最初的诊断。VCD患者、已从损害中恢复的患者和未受损个体之间的血清叶酸、同型半胱氨酸（HCY）和维生素B12基础水平未观察到显著的统计学差异，详见补充文件3。

补充维生素B12可有效调节VCD患者白细胞中持续失调的炎症基因

在首次诊断后6至12个月，与未受损的受试者相比，持续存在VCD的个体白细胞中CCL11（P = 0.0127）和LIF（P = 0.0485）的表达持续上调（图2）。重要的是，当将全血培养物与 1 nM 的维生素 B12 孵育 24 小时后，受损组中 CCL11 的表达水平恢复至与未受损组（仅用赋形剂孵育）培养物中观察到的水平相当（P > 0.05）。维生素 B12 还下调了受损个体白细胞中 CSF2（P = 0.0071）和 CXCL10（P = 0.0205）的表达，尽管与未受损组相比，这些基因的表达水平没有差异。此外，与未受损组（仅用赋形剂孵育）相比，维生素 B12 提高了受损组中 HGF 的 mRNA 水平（P = 0.0081）。在比较受损个体和非受损个体时，CCL2、IL10、IL1RA 和 IL6 的表达无差异，且这些基因对维生素 B12 的孵育无反应（补充文件 4）。所有志愿者的白细胞中均未检测到 IL31 和 NGF mRNA。

图 2

补充维生素 B12 可有效调节 VCD 患者白细胞中持续失调的炎症基因。小提琴图描绘了全血培养 (WPBC) 中白细胞内一组炎症和生长因子基因的表达水平。终点 A：WPBC 与赋形剂孵育。终点 B：WPBC 与 1 nM 维生素 B12 孵育。浅蓝色方块代表在招募时被诊断为 VCD 但在随访预约前已康复的个体。黑色轮廓的圆圈或方块表示参加了12个月随访的个体。在其他情况下，圆圈和方块均表示参加了6个月随访的个体。根据实验设计和数据分布，采用双尾Student’s t检验、配对Student’s t检验、Mann-Whitney U检验或Wilcoxon秩和检验对组间基因表达值（2e(-ΔCt)）进行两两比较。数值以中位数表示。* P < 0.05；** P < 0.01。

受损个体在 CCL11 启动子区域的 CpG 位点表现出低甲基化，补充维生素 B12 后这些位点则呈现高甲基化。

与非受损组相比，受损个体中有三个 CpG 位点表现出低甲基化。值得注意的是，用维生素 B12 处理细胞培养物后，其中两个 CpG 位点的甲基化水平显著升高。此外，这些 DML 的甲基化状态与 CCL11 的 mRNA 水平呈显著负相关。根据 JASPAR CORE 2022 数据库，这些 DML 位于预测的转录因子结合位点 (TFBS) 处（图 3）。

图 3

VCD 患者在 CCL11 启动子区域的 CpG 位点表现出低甲基化，补充维生素 B12 后这些位点则呈现高甲基化。A = 棒棒糖图，描绘了 CCL11 启动子区域和第一个外显子近端部分 DML 的甲基化水平倍数变化。 B、C 和 D = 使用非配对 t 检验比较各组间 CpG 位点甲基化水平的倍数变化。棒棒糖旁边的数值表示各 DML 甲基化水平倍数变化与基因表达值之间的相关系数（Pearson 或 Spearman），具有统计学意义（* P < 0.05 或 ** P < 0.01）。在分析基因区域的示意图中，黑线代表 CCL11 启动子区域，黑色方块界定了 5′ UTR 区域（细方块）和基因第一个外显子的近端部分（粗方块）。红色粗虚线表示 CCL11 的转录起始位点，橙色方框表示预测的转录因子结合位点。紫色线条对应于坐标 (GRCh38/hg38) 处的 DML：a = chr17: 34,283,605； b = chr17: 34,283,701；c = chr17: 34,285,656。图中，黑色轮廓的圆圈或方块表示参加了 12 个月随访的个体。在其他情况下，圆圈和方块均表示参加了 6 个月随访的个体。均值±标准差线。*P < 0.05。DML = 差异甲基化位点；TSS = 转录起始位点。后缀：A = 终点 A（全血培养物 (WPBC) 与赋形剂孵育）；B = 终点 B（WPBC 与 1 nM B12 孵育）。

讨论

视觉空间障碍（VCD）的特征是视觉感知和构建复杂视觉空间设计或任务的能力受损，是与衰老相关的神经退行性疾病（包括阿尔茨海默病）的公认特征26。本研究中纳入的年轻人出现这种症状值得关注。这提示轻症 COVID-19 患者可能更容易发展为与神经退行性疾病相关的严重疾病。此外，初次诊断后 6 至 12 个月持续存在 VCD 的高患病率（57%）也令人担忧。

在招募时，先前已发现 11 种血浆炎症因子和生长因子与长期 COVID-19 患者的 VCD 相关4，但在轻症 COVID-19 感染 4 个月后，仅有 CCL11 和 LIF 在持续存在 VCD 的患者的白细胞中表现出转录上调。因此，与在入组至六个月随访期间恢复认知功能障碍的个体相比，在发生血管性认知障碍（VCD）的个体的血浆中检测到了CCL11蛋白水平升高20。CCL11，又称嗜酸性粒细胞趋化因子-1（eotaxin-1），是一种将嗜酸性粒细胞趋化至炎症部位的趋化因子。在中枢神经系统（CNS）中，CCL11与年龄相关的认知衰退、精神疾病、多发性硬化症（MS）和阿尔茨海默病（AD）有关（综述见27）。在刺激下，CCL11可以通过血脑屏障（BBB）从血液转运至大脑，或主要由活化的星形胶质细胞分泌。CCL11主要通过CCR3受体发挥作用，该受体由小胶质细胞、星形胶质细胞和神经祖细胞表达（综述见28）。高水平的这种趋化因子可上调神经胶质细胞中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 (NOX1)，从而触发活性氧 (ROS) 的产生，并增强谷氨酸诱导的神经元死亡29。CCL11 还抑制神经祖细胞增殖，损害神经发生以及海马相关的学习和记忆30,31,32。最近的研究表明，在轻症 COVID-19 小鼠模型中，CCL11 是长期脑损伤的关键生物标志物33。CCL11 在长期 COVID 中发挥神经退行性作用的主要机制之一被认为是诱导海马小胶质细胞增生，导致神经发生减少和有髓皮质下轴突退化27。综上所述，可以合理地得出结论：CCL11 是轻症 COVID-19 后持续性认知后遗症的强效生物标志物，并可能成为 VCD 治疗的关键靶点。LIF 是白细胞介素-6 家族中的一种多功能神经营养细胞因子。尽管其功能复杂且具有情境特异性，但

在中枢神经系统（CNS）中，LIF信号通路对神经元和胶质细胞的存活和功能既有保护作用也有损害作用，对维持神经系统至关重要（综述见：34）。LIF已被证实是神经元表型的调节因子，也是中枢神经系统中胶质细胞和炎症细胞反应的协调因子（综述见：34,35）。此外，LIF蛋白已被证明可以增加HGF的转录，HGF编码一种重要的神经保护分子36。然而，LIF在COVID-19长期症状期间于中枢神经系统的具体作用仍有待进一步阐明。

在随访期间，持续性VCD患者的白细胞中未观察到CCL2、CSF2、CXCL10、HGF、IL10、IL1RA或IL6 mRNA水平的显著变化。然而，在损伤消退之前降低这些分子的水平是否有益尚不清楚。 HGF是一种强效的神经营养因子，能够促进神经发生，并已被证实对神经退行性疾病具有神经保护作用（综述见：37）。IL-10是一种抗炎细胞因子，能够负向调节免疫反应，减少炎症，并保护机体免受与神经退行性疾病相关的神经炎症过程的影响（综述见：38）。IL-1RA能够抑制IL-1的促炎作用，防止过度炎症，并减轻与神经系统疾病相关的神经炎症过程（综述见：39）。这些发现表明，在持续性VCD患者中，神经保护和抗炎反应协同下降。值得一提的是，在Souza-Silva等人2024年开展的一项前瞻性队列研究中，CXCL10和HGF水平升高以及IL-10蛋白水平降低与从入组到六个月随访期间认知功能恶化相关（综述见：20）。这些作者分析了认知状态在入组和六个月随访期间由声带功能障碍（VCD）转变为康复（或反之）的患者的血浆蛋白水平，而本研究则评估了在入组和六个月或十二个月随访期间诊断保持不变的志愿者的全血培养物中这些生物标志物的mRNA水平。然而，不建议直接比较这两个实验，需要进一步研究来阐明长期COVID相关持续性VCD中所研究生物标志物的转录-翻译动态。

志愿者白细胞中IL-31和NGF mRNA的缺失表明，它们编码的蛋白质（此前发现，在轻度急性COVID-19后四个月的入组随访期间，VCD患者的血浆样本中这些蛋白质水平升高）可能主要由其他细胞类型产生40,41,42。

甲基化是一种基本的生化机制，在神经炎症和神经退行性疾病中对基因表达的调控起着至关重要的作用43,44,45。叶酸和维生素B12是该机制的重要辅助因子，参与一碳代谢。这些维生素水平不足会阻碍同型半胱氨酸（HCY）有效转化为蛋氨酸，从而破坏甲基化循环并降低细胞的甲基化能力。同时，HCY会在血液中积累，导致高同型半胱氨酸血症。已有研究报道，急性COVID-19的严重程度与叶酸和维生素B12浓度低相关46,47。相反，一些研究报道，COVID-19预后较差的患者血液中维生素B12水平较高48,49，这可能是由于细胞溶解导致细胞内维生素B12释放到血浆中，以及肝脏对维生素B12的清除受损所致，而肝脏功能在这些患者中通常受到影响50。然而，维生素B12水平对轻症COVID-19后认知功能后遗症的影响仍需进一步研究。本研究发现，在患有VCD的患者、认知功能恢复者以及无认知功能障碍者中，基础血清叶酸、维生素B12和同型半胱氨酸（HCY）水平均未发生改变。值得注意的是，在持续性VCD患者的外周全血培养物中加入维生素B12后，CCL11表达恢复正常，神经保护性HGF水平升高，而CSF2和CXCL10 mRNA水平降低（图2）。需要强调的是，CSF2和CXCL10编码与神经退行性疾病相关的促炎蛋白51,52,53，并且如上所述，CXCL10蛋白水平升高与本研究同一队列中持续性VCD患者相关20。除了通过甲基依赖性表观遗传机制调节基因表达外，维生素B12还因其神经保护、抗氧化和抗炎特性而为人所知54。在急性COVID-19疫情中，既往研究表明维生素B12可增加含硫氨基酸途径的流量，促进细胞内毒素的生成。

在患有中重度 COVID-19 的患者的白细胞中，谷胱甘肽（一种重要的抗氧化剂）的含量有所降低18。此外，每日补充维生素 B12 改善了 COVID-19 住院患者的临床预后55，并且能够有效缓解一名轻症 COVID-19 康复患者的长期 COVID 症状56。综上所述，这些发现表明，维生素 B12 可能具有降低神经炎症和促进神经保护的潜在益处，尤其适用于在经历轻度急性 COVID-19 后长期存在持续性血管性认知障碍 (VCD) 的患者。

在 CCL11 启动子区域中观察到的差异甲基化 CpG 位点位于预测的转录因子结合位点 (TFBS25) 处。转录因子 (TF) E2F7 (JASPAR ID: MA0758.1) 和 E2F8 (JASPAR ID: MA0865.2) 可结合包含 DML a (chr17: 34283605) 的区域，而 E2F6 (JASPAR ID: MA0471.2) 和 TFDP1 (JASPAR ID: MA1122.1) 可结合该 DML 在负链上的互补区域。E2F6、E2F7 和 E2F8 均属于 E2F 转录因子家族，该家族在细胞周期调控、细胞增殖和存活以及基因表达中发挥重要作用57。TFDP1 与 E2F 蛋白形成异二聚体，增强其 DNA 结合活性，并促进 E2F 靶基因的转录57。然而，目前针对中枢神经系统 (CNS) 背景下 E2F6-8 与 CCL11 转录之间关系的研究十分有限。关于DML b（chr17: 34283701），ZNF136（JASPAR ID：MA1588.1）可以结合负链上的互补区域，但尚无证据表明其对CCL11表达有影响。NPAS4（JASPAR ID：MA2042.1）可以结合包含DML c（chr17: 34285656）的区域，而RARA::RXRA（JASPAR ID：MA0159.1）和RARA::RXRG（JASPAR ID：MA1149.1）可以结合该位点的互补区域。NPAS4是一种神经保护蛋白，作为转录因子，调控多种参与突触可塑性、神经传递和神经元存活的基因的转录58。然而，关于其与CCL11的特异性相互作用的研究有限。 RARA::RXRA 和 RARA::RXRG 复合物是由视黄酸受体α (RARA) 与视黄酸X受体α (RXRA) 或视黄酸X受体γ (RXRG) 结合形成的异二聚体蛋白复合物59。这些复合物参与介导视黄酸信号通路的作用，而视黄酸信号通路在发育、细胞分化和免疫反应中发挥着至关重要的作用59。既往研究表明，使用 RXR 部分激动剂可以减轻嗜酸性粒细胞性气道炎症，这种炎症部分是由 CCL1 的趋化活性介导的60。RXR 激动剂在治疗某些神经病变方面也有效，例如在动物模型中治疗阿尔茨海默病61和帕金森病62。虽然目前尚无充分证据表明 RARA::RXRA 和 RARA::RXRG 复合物与中枢神经系统 (CNS) 中 CCL11 的表达直接相关，但可以合理推测，视黄酸通过这些复合物发出的信号可能在某些特定脑部疾病中抑制 CCL11 的表达。此外，DML c 位于调控区域内，该区域包含 EZH2、CTCF、GPS2 和 TCF21 的结合位点，这些位点存在于多种细胞类型中63。这些转录因子通过与组蛋白修饰因子、染色质重塑复合物、转录调控因子和/或 DNA 甲基化机制相互作用，作为染色质结构的表观遗传调控因子，进而调控基因表达。因此，可以合理推测，该区域 CpG 甲基化水平的变化可能反映在表观遗传图谱中，并可能促进 CCL11 的表达。总而言之，这项重要发现凸显了将 CpG 甲基化模式作为以 CCL11 上调为特征的神经退行性疾病诊断生物标志物的潜力。

本研究通过检测维生素B12与受损个体白细胞培养物中DML a和c的过度甲基化，证实了维生素B12可通过甲基依赖性表观遗传机制调节持续性VCD期间CCL11表达的假设。维生素B12诱导的DML甲基化水平升高与CCL11表达水平呈负相关（图3）。这些发现为CCL11的表观遗传调控提供了强有力的证据，并提示补充维生素B12可能作为一种表观遗传药物，用于治疗与CCL11异常表达相关的神经退行性疾病。

本研究为与新冠长期症状相关的持续性VCD的潜在机制提供了宝贵的见解，并强调了维生素B12作为一种表观遗传药物在预防或减轻这种损伤方面的治疗潜力。然而，在解读研究结果时应考虑以下几个局限性。样本量较小，且仅限于女性，这限制了研究结果的普遍适用性。

值得注意的是，本研究纳入的志愿者在2021年感染新冠病毒时症状较轻，当时SARS-CoV-2 Omicron变种尚未出现，巴西人群也尚未经历完整的COVID-19疫情。

-19 疫苗接种计划。COVID-19 疫苗接种与部分（但并非所有）COVID-19 后遗症的风险降低相关64。本研究并非旨在评估疫苗接种对 COVID-19 后遗症 VCD 的保护作用。因此，在将本研究结果外推至完成疫苗接种后感染或感染了较新 SARS-CoV-2 变种的个体时，应谨慎。

全血培养模型是研究生理相关环境下免疫反应、炎症和分子过程的宝贵工具，与使用单一类型细胞的体外研究相比，它能更真实地反映血液组织的复杂性。然而，还需要使用动物模型进行进一步研究，以评估维生素 B12 作为一种表观遗传药物在体内调节与长期 COVID 相关的持续性 VCD 的外周生物标志物的潜力，并确定其是否具有神经保护作用。

结论

本研究提供了令人信服的证据，强调了全身炎症在与长期 COVID 相关的持续性 VCD 中的重要性（图 4）。值得注意的是，该研究报告称，VCD 患者外周血白细胞中 CCL11 持续上调。研究发现，这种上调与 CCL11 基因启动子区域三个胞嘧啶的甲基化状态呈显著负相关。综上所述，这些发现支持将 CCL11 mRNA 水平或启动子甲基化模式作为长 COVID 后 VCD 的潜在生物标志物。此外，研究结果表明，补充维生素 B12 有望成为长 COVID 后 VCD 患者的一种治疗方法。

图 4

该研究的图形表示（使用 BioRender.com 创建）。

数据可用性

本文结论所依据的数据集可在 SRA 存储库中获取 [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA992778]。补充信息见附件 1 至 4。

缩写

BBB：血脑屏障
BSP：亚硫酸氢盐测序 PCR
CNS：中枢神经系统
COVID-19：2019冠状病毒病
CpG：胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤
DML：差异甲基化位点
HCY：同型半胱氨酸
MS：多发性硬化症
PET-CT：正电子发射断层扫描-计算机断层扫描
ROCF：雷氏复合体图
ROS：活性氧
RT-qPCR：实时定量PCR反应
SARS-CoV-2：严重急性呼吸综合征冠状病毒2
TF：转录因子
TFBS：转录因子结合位点
VCD：视觉构建缺陷
WHO：世界卫生组织

英文原文来源: NATURE

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资助

本研究由以下机构资助：INOVA FIOCRUZ（VPPCB-005-FIO-20-2-115）、高等教育人员培训协调委员会（CAPES）（88881.504749/2020-01.9951）、国家科学技术发展委员会（CNPq）（408817/2022-4）、国家疫苗科学技术研究所（INCT-Vaccines）以及国家负责任神经技术科学技术研究所（INCT-NeuroTec-R；406935/2022）。LMGC 获得 CAPES 博士奖学金。

作者信息

作者及单位

神经基因组学、免疫病理学，René Rachou 研究所，Fiocruz，Av.奥古斯托·德利马，贝洛奥里藏特，1517，巴西

拉里萨·M·G·卡西亚诺 & 罗尼·S·科英布拉

生物化学和免疫学系，米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG)，贝洛奥里藏特，巴西

拉里萨·M·G·卡西亚诺

巴西贝洛奥里藏特米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG) 医学院精神病学系

乔纳斯·J·德·保拉、丹妮拉·V·罗莎和马可·A·罗马诺-席尔瓦

分子医学技术中心 (CTMM)，米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG)，贝洛奥里藏特，巴西

乔纳斯·J·德·保拉 (Jonas J. de Paula)、丹妮拉·V·罗莎 (Daniela V. Rosa)、黛博拉·M·米兰达 (Débora M. Miranda) 和马可·A·罗马诺-席尔瓦 (Marco A. Romano-Silva)

米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG) 医学院儿科系，巴西贝洛奥里藏特

Débora M. Miranda

贡献
研究构思和/或设计：JJP、DMM、MAR-S 和 RSC。临床评估：JJP。数据采集：LMGC、JJP 和 DVR。数据分析：LMGC、JJP、DVR、DMM、MAR-S 和 RSC。论文撰写和/或修订：LMGC、JJP、DVR、DMM、MAR-S 和 RSC。

通讯作者

通讯作者：Roney S. Coimbra。

伦理声明

伦理审批和参与者知情同意

本研究已获得米纳斯吉拉斯联邦大学 (UFMG) 机构审查委员会 (IRB) 的批准 (CAAE3768820.1.0000.5149)。

发表同意

所有参与者均签署了书面知情同意书。

利益冲突声明

作者声明不存在利益冲突。

补充信息

出版商声明

施普林格·自然出版社对已出版地图中的管辖权主张和机构隶属关系保持中立。